Separación Celular y Citometría

La citometría de flujo permite estudiar características celulares que pueden monitorizarse mediante técnicas de absorción-dispersión de luz o de emisión de fluorescencia, como: función metabólica de las células (Nivel de pH, calcio, estado redox), expresión de un gen reporter, expresión de antígenos (intra o extracelulares), tamaño y complejidad interna, contenido de ADN (ciclo celular), apoptosis celular…

El citómetro separador permite la separación de células en función de las características analizadas por citometría de flujo. Para ello divide el chorro de fluido en gotas y carga eléctricamente las que contienen las células de interés que luego son separadas aplicando un campo eléctrico.

El equipo Exoview R200 de Unchained Labs permite medir la concentración y el tamaño de exosomas sin necesidad de tratamiento previo de la muestra, su sistema de captura de exosomas en un chip mediante anticuerpos de captura y posterior adición de anticuerpos fluorescentes de detección permite determinar la expresión de moléculas en la superficie de exosomas, el sistema es altamente flexible permitiendo que el usuario incorpore los anticuerpos de captura y detección de su elección. Por otra parte, permite estudiar el cargo interno de los exosomas o de partículas víricas de interés.

Citómetro analizador espectral Sony SA3800 de Sony, equipado con 4 láseres coliniales (405, 488, 561 y 638 nm) con 2 detectores específicos para el láser violeta (420 y 500 nm) y tecnología espectral que recoge toda la emisión desde 500 a 800 nm. La tecnología espectral ofrece la posibilidad de utilizar simultáneamente fluorocromos con espectros de emisión muy similares aumentando las opciones de diseño de los experimentos. Posee la capacidad de tomar la muestra directamente de una placa de 96 pocillos.

Separador de 3 láseres coliniales de 405, 488 y 635 nm con 6 detectores de fluorescencia, permite separar hasta 2 poblaciones a la vez. Ofrece la posibilidad de separar en tubos de 5 o 15 ml y en placa de 6,12, 24,48,96 y 384 pocillos. Posibilidad de separación clonal (una sóla célula por pocillo).

Incorpora el software LUMINEX 100 IS que le permite gran versatilidad pudiendo analizar concentración de proteínas, presencia de polimorfismos, concentración de micro RNAs, factores de trascripción, etc.

Citometro analizador con 3 láseres 405, 488 y 635 nm, posibilidad de medir simultáneamente 12 parámetros (10 fluorescencias y dispersión frontal y lateral) permite toma de muestra desde un carrusel automatizado

El citómetro de flujo Attune™ funciona con la tecnología de enfoque acústico – tecnología patentada y únicos equipos del mercado que la tienen. Se combinan ondas ultrasónicas para posicionar con precisión las células en una única línea enfocada en el eje central del capilar. Esto permite que las células se enfoquen estrechamente en el punto de interrogación del láser y que el sistema recopile más fotones, lo que ayuda a garantizar la calidad de los datos a todas las velocidades de adquisición: desde 12, µL/min hasta 1.000 µL/min. El sistema es capaz de analizar hasta 35.000 eventos/segundo, 10 veces más rápido que el resto de los equipos del mercado. Gracias al enfoque acústico, el Attune™ consume muy poco consumible: 1,8 L/8horas, en comparación con otros equipos del mercado que consumen 10 L/8horas, esto supone 5 veces menos que el resto de los equipos del mercado.

Attune™ CytPix tiene una cámara de campo claro (20x) de alta velocidad (hasta 6.000 imágenes/segundo) que registra imágenes al momento de células individuales. La cámara y el software Attune Cytometric permiten a los usuarios verificar visualmente que los eventos registrados por el detector son células individuales en lugar de dobletes, grupos o desechos. Esto es crucial en aplicaciones de investigación de terapia celular y génica. Además, el software de imagen tiene más de 25 parámetros para poder analizar la población con más precisión: área y perímetro (µm2), entropía, intensidad, particle/Cell count, etc. Las actualizaciones del software son gratuitas.

Tiene 4 láseres espacialmente separados: violeta (405 nm), azul (488 nm), amarillo (561 nm) y rojo (637 nm) con 3 canales para el láser azul, 3 canales para el láser rojo, 4 canales para el láser violeta y 4 canales para el láser amarillo, en total 14 colores + FSC + SSC (imagen de configuración al final del documento). Los láseres son de superficie plana, tienen un perfil de intensidad que permite una ventana de alineación más amplia que los láseres gaussianos utilizados en los sistemas tradicionales. Esto confiere una mayor tolerancia a la desalineación, y permite mantener una alta sensibilidad y CV bajos.

Por último, el equipo adquirido, tiene una estación que permite la toma de muestra directamente desde placa de 96 pocillos.

Citómetro de flujo Attune™

Análisis de interacción entre células CAR-T u una línea de células de Linfoma B en el Attune Cytpix.